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Apr 10, 2023

The ISME Journal (2023) Cite este artigo

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A análise multi-ômica é uma ferramenta poderosa para a detecção e estudo de interações entre reinos, como aquelas entre membros bacterianos e archaeais de comunidades microbianas produtoras de biogás complexas. No presente estudo, os microbiomas de três digestores de biogás em escala industrial, cada um alimentado com diferentes substratos, foram analisados ​​usando uma estrutura de metagenômica centrada no genoma guiada por aprendizado de máquina complementada com dados de metatranscriptoma. Esses dados nos permitiram elucidar a relação entre comunidades metanogênicas centrais abundantes e seus parceiros bacterianos sintróficos. No total, detectamos 297 genomas montados por metagenoma não redundante (nrMAGs) de alta qualidade. Além disso, os perfis do gene 16 S rRNA desses nrMAGs mostraram que o filo Firmicutes possuía o maior número de cópias, enquanto os representantes do domínio archaeal tinham o menor. Uma investigação mais aprofundada das três comunidades microbianas anaeróbicas mostrou alterações características ao longo do tempo, mas permaneceu específica para cada usina de biogás em escala industrial. A abundância relativa de vários microorganismos, conforme revelado pelos dados de metagenoma, foi independente dos dados de atividade de metatranscriptoma correspondentes. Archaea mostrou atividade consideravelmente maior do que o esperado de sua abundância. Detectamos 51 nrMAGs que estavam presentes em todos os três microbiomas de plantas de biogás com diferentes abundâncias. O microbioma central se correlacionou com os principais parâmetros químicos de fermentação, e nenhum parâmetro individual emergiu como formador predominante da composição da comunidade. Vários mecanismos de transferência interespécies de H2/elétron foram atribuídos a metanogênios hidrogenotróficos nas usinas de biogás que funcionam com biomassa agrícola e águas residuais. A análise dos dados de metatranscriptoma revelou que as vias de metanogênese foram as mais ativas de todas as principais vias metabólicas.

Em sistemas de digestão anaeróbica (AD) projetados, a decomposição da matéria orgânica e a produção de biogás são baseadas na reciclagem eficiente de nutrientes [1, 2]. Este processo envolve uma comunidade microbiana diversificada, com cada micróbio tendo um papel específico. A composição e a função da comunidade microbiana envolvida nos estágios da DA desempenham um papel importante na eficiência do processo geral, que também é influenciado por vários fatores, como interações micróbio-micróbio, composição do substrato, parâmetros físico-químicos e condições operacionais [3,4,5,6].

Desvendar as interações microbianas e seus mecanismos subjacentes é uma tarefa complexa, uma vez que muitos micróbios não podem sobreviver sem parceiros microbianos específicos [7]. Métodos inovadores para isolamento e cultivo microbiano foram desenvolvidos, alguns com sucesso em trazer novos microrganismos para a cultura [8]. No entanto, mais desenvolvimento e avanço dessas tecnologias são necessários para liberar todo o potencial da diversidade microbiana [9, 10]. Uma vez que existem fortes interações sintróficas entre os micróbios nos consórcios microbianos da DA, é necessária uma pesquisa aprofundada para entender sua diversidade, papel metabólico e distribuição. Esses estudos foram inicialmente dificultados por limitações inerentes aos métodos microbiológicos dependentes de cultura, que requerem o isolamento de microrganismos e podem ser desafiadores quando as relações sintróficas são onipresentes [11,12,13]. Ferramentas de sequenciamento e bioinformática de alto rendimento permitem a análise em massa de material genômico e, assim, fornecem informações sobre a taxonomia e as funções de comunidades microbianas inteiras [14,15,16].

A identificação e caracterização do genoma de micróbios comumente encontrados em microbiomas da DA podem revelar caminhos cruciais e características ecológicas envolvidas na cadeia alimentar microbiana [17, 18]. Estudos anteriores usando o sequenciamento de amplicon do gene 16 S rRNA mostraram que os microorganismos centrais criam uma comunidade estável capaz de resistir a várias perturbações (isto é, mudanças nos parâmetros da DA) [19,20,21]. No entanto, o sequenciamento de amplicon e as abordagens de metagenômica baseadas em leitura podem ser incapazes de identificar espécies desconhecidas pela análise do microbioma central devido à sua dependência de bancos de dados de referência [22, 23]. Além disso, as comunidades produtoras de biogás representam um grande e diversificado contingente de microrganismos não caracterizados que foram descritos anteriormente como uma "matéria escura microbiana" [19, 24, 25]. Para resolver esse problema, algoritmos bioinformáticos cada vez mais sofisticados podem ser usados ​​para reconstruir os genomas de espécies individuais (ou MAGs: genomas montados por metagenoma) dessas comunidades complexas [26,27,28].

5% contamination by CheckM2 analysis (Fig. 2A and B). Furthermore, 24% of nrMAGs (n = 70) were identified at a quality level that was higher than their representatives in the Genome Taxonomy Database (Supplimentary Table 3). These observations confirm the effectiveness of Semibin as a binning procedure for complex anaerobic biogas-producing communities [35]. In addition, the larger number of unique nrMAGs binned by Semibin may also lead to better mapping of metatranscriptome data./p>90%), low contamination (<5%) and have not been found in any available databases (Archaea: MAG_165_3; Bacteria: MAG_114_1, _18_1, 29_1, 77_1, 87_1 and 95_2). Purple symbols represent the core nrMAGs. The outer ring represents bacteria that are significantly more prevalent in the particular BP (using lefser, p < 0.05)./p>90%; n = 107) were present in the Biogas Microbiome database (ANI cutoff: 95%). It is worth noting that seven high-quality nrMAGs, which accounted for 7% of the total high-quality nrMAGs (n = 107) and 2% of all nrMAGs (n = 297), could not be associated with a nearest representative in either database. These nrMAGs were deemed novel because they did not meet the following criteria: species-level identification with 95% reference radius for GTDB and ≥95% ANI for Biogas Microbiome (Fig. 4 and Suppl. Table 3). Three high-quality nrMAGs were found to contain 16 S rRNA gene sequences as well (Supplimentary Table 3). In addition, the seven putative novel nrMAGs demonstrated high abundance and activity, accounting for 3% of the total count per million (CPM) and 5% of the total transcripts per million (TPM), respectively, in the examined microbiome. These nrMAGs may be members of the hypothesised microbial dark matter that can now be released into the realm of known participants in AD communities./p> 0.5). Based on this observation, eight clusters showing characteristic correlations with AD chemical parameters were plotted (Fig. 6B). The eight clusters can be divided into two groups, with microorganisms from clusters I–V correlating positively with the main influencing parameters and microorganisms from clusters VI–VIII correlating negatively with these parameters. We also found that top core nrMAGs belonging to the phyla Firmicutes, Spirochaetota, and Methanobacteriota were positively correlated with TAN, VOAs, and TIC, while members of the phylum Bacteroidota were also correlated with many of the measured parameters. Finally, the C/N ratio showed a more pronounced impact on Bacteroidota than Firmicutes among the top core nrMAGs (Fig. 6B)./p> 0.7 based on network. The blue lines represent positive correlations (Pearson's rho > 0.7), red lines represent negative correlations (Pearson's rho < −0.7). A phylum marked with an asterisk is not present among the correlating microorganisms. B Pearson correlations between core nrMAGs and measured AD chemical parameters. Asterisks represent the significant correlations (considered statistically significant as follows: p < 0.05 (*), p < 0.001 (**), p < 0.0001 (***), ns (no significant difference)). Using the cladogram shown on the left and data for TAN (total ammonia nitrogen), VOAs (volatile organic acids), TIC (total inorganic carbon), TS (total solids) and C/N (carbon to nitrogen ratio), eight clusters were distinguished. These are shown here separated by colour as follows: Cluster I: grey; Cluster II: brown; Cluster III: yellow; Cluster IV: green; Cluster V: purple; Cluster VI: blue; Cluster VII: orange; and Cluster VIII: dark green. Coloured boxes represent the specific phyla to which the nrMAGs belong to. Red dots represent the top hydrolysing nrMAGs (n = 10)./p> −0.7). Based on genomic data, these archaea belong to the class of methanogens capable of maintaining hydrogenotrophic methanogenesis using formate as an electron donor. Typically, formate is oxidised to CO2 by formate dehydrogenase, upon which it is further reduced to methane [85]. Here, interspecies formate transfer (IFT) was maintained by microbial partners, namely SR-FBR-E99 sp002497965 and LD21 sp012519515 (from the phylum Bacteroidota; MAG_72_3 and MAG_394_2), which were positively correlated with MAG_26_2 and MAG_103_2 (Fig. 6A). These MAGs have been previously detected in biogas digesters and were described for their versatile hydrolysing ability. Aside from carbohydrate utilisation, they are protein- and amino-acid degrading microorganisms capable of producing formate. They were also consistently detected alongside formate-utilising methanogens [86]./p> 0.6). However, there were exceptions involving microorganisms belonging to Cluster VII./p> 2.0, p < 0.05). The heat map depicts the average gene activity of each methanogen in the various BPs. The blanks represent genes that were not significantly different in the provided methanogen, or the indicated gene is absent in the given nrMAG./p> 2.0, p ≤ 0.05) (Supplimentary Table 5). KBP and SZBP were shown to contain fewer differentially expressed genes (DEGs) than these compared to MWBP (Fig. 8B and Supplimentary Fig. 2). A comprehensive investigation of DEGs found 215 genes involved in methanogenesis. The activities of alpha, beta, and gamma subunits of methyl coenzyme M reductase showed the most substantial changes (log2 FC > 10, p < 0.0001). Additionally, the expression of genes implicated in hydrogenotrophic methanogenesis, such as the ion-sulphur subunit of F420-non-reducing hydrogenase and methylenetetrahydromethanopterin dehydrogenase, displayed substantial differences (log2 FC > 5, p < 0.001). Acetyl-CoA synthetase demonstrated variances in expression across genes involved in acetotrophic methanogenesis (log2 FC > 5, p < 0.001) [99]. The majority of the different gene activities in KBP were related to Methanothrix A harundinaceae D (MAG_5_1), while Methanothrix_sp016706325 (MAG_97_2) in MWBP and Methanobacterium sp012838205, Methanoculleus sp12797575, and Methanosarcina species (MAG_669_3, _57_1, and _165_3) in SZBP (Fig. 8C)./p>90% cont. <5%) nrMAGs are deposited in the NCBI SRA under accession numbers from SAMN32989584 to SAMN32989690. The main data generated or analysed for this study are included in this published article and its supplementary information files. Workflows and R scripts are available from the first author on reasonable request./p>